.RU

Иммуногистохимический анализ - Hematopathology / b-cell Markers in Hodgkin Lymphoma

Иммуногистохимический анализ.


Парафиновые блоки были приготовлены, в 4 µm для микроскопии. После процедуры HIER, материалы, охлаждались и промывались в 0.01-mol/L.

Иммуногистохимический анализ выполнялся с помощью TechMate 500 (Ventana Medical Systems). Использовались следующие первичные моноклональные антитела: анти-BSAP ( антитело 24, Лаборатория Transduction, BD Biosciences, Lexington, KY); анти-PU.1 (G148-74, Лаборатория Transduction, BD Biosciences); анти-CD20 (L26, DAKO); анти-CD22 (FPC1, Novocastra, Newcastle upon Tyne, England); и анти-CD79a (HM57, DAKO).

Поликлональные антитела, использовались с целью определения факторов Oct-2 (sc-233, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, C A) и BOB.1 (sc-955, Santa Cruz Biotechnology). Антитела для BSAP, Oct-2, BOB.1, и PU.1 использовались в разведениях 1:200, 1:1,000, 1:2,000, и 1:1,500 соответственно.

Образцы ткани выделялись вместе с первичными антителами в течение 60 минут при комнатной температуре. Оценка результатов, независимо проводилась двумя исследователями (P.B. and K.P.). Результаты подсчитывались в диапазоне от 0 to 3+

( отрицательный, слабый, умеренный и соответственно сильный).

Результаты.



Реактивная лимфоидная ткань.

Все 8 реактивных ткани, показывали стойкое взаимодействие B- клеток с BSAP Oct-2, и BOB.1.








Рисунок 1.

Реактивная фолликулярная гиперплазия.

A

. клетки зародышевого центра (FCCs) и мантийные клетки (MCs) показывают сильную связь с (специфичным B-клеточным активатором белка [BSAP], ×200).

B

. отмечена связь с фактором PU.1. клетки макрофаги и гистиоциты показывают более сильный ответ, чем FCCs и MCs (PU.1, ×400).

C

. Присутствие подобного BSAP, октаймер - обязательного фактора транскрипции 2 [Oct-2]. FCCs показывают более выраженную связь с фактором, чем MCs (Oct-2, ×200).

D

. В отличие от других факторов транскрипции, обязательный B-клеточный белок 1 [BOB.1] присутствовал и в ядре и в цитоплазме клеток. FCCs показывают более выраженную связь с фактором, чем MCs (BOB.1, ×200).

Присутствие BSAP фактора наблюдалось чаще в ядре, со случайным обнаружением в цитоплазме, больше обнаруживался в клетках зародышевого центра и мантийных клетках. Преобладание фактора Oct-2 больше наблюдалось в цитоплазме. Это показывало большую частоту обнаружения в клетках зародышевого центра и меньшую в мантийных клетках. Преобладание ядерного и цитоплазматического фактора BOB.1 чаще выявлялось в клетках зародышевого центра, чем в мантийных клетках. Было определено наличие фактора PU.1 только в ядре, с одинаковым преобладанием, как в клетках зародышевого центра, так и в мантийных клетках, однако обнаружение этого фактора в B- клетках было ниже, чем в клетках макрофагах и гистиоцитах, используемых как контроль.



Классическая лимфома Ходжкина.



Список 1, включает 57 исследованных случаев CHL и рисунок 2 показывает эти результаты.



Рисунок 2. Классическая лимфома Ходжкина (CHL).

A

. Вариант лакунарных клеток Рида- Штернберга при нодулярном склерозе CHL, присутствующих среди большого количества маленькихB- и T- клеток (H&E, Ч1,000).

B

. RS клетки и некоторые другие B- клетки имели более частое присутствие ядерного специфичного B-клеточного активатора белка [BSAP]. Вообще фактор BSAP, наблюдался чаще в большинстве RS клеток (PU.1, Ч1,000).

D

. В отличие от BSAP, экспрессия октаймер-обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2) снижена в RS клетках. В этой области RS клетка на 10 часах - положительна, в то время как другие на 1 и 3 часах - отрицательны (Oct-2, Ч400).

E

. Подобно экспрессии Oct-2, экспрессия обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) наблюдается в подтипе RS клеток, но ниже, чем при BSAP (BOB.1, Ч400).

F

, Экспрессия маркера CD20 обнаруживалась только в 30% случаев (17/57); однако экспрессия была сильнее в большинстве RS клеток (CD20, Ч400). Умеренная экспрессия маркеров CD22 (Ч400) и CD79a (Ч400), обнаруживалась в подтипе RS клеток.

Экспрессия факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1 отмечалась в 91% (52/57), 33% (19/57), 28% (16/57) всех случаев, соответственно. В 10 случаях (18%), определялись факторы BSAP, Oct-2, и BOB.1. В большинстве случаев (72% [41/57]), BSAP был отнесен к среднему показателю (2+/3+) и наблюдался в большинстве клеток Рида – Штернберга.

В большинстве случаев (49/57 [86%]), показатели фактора BSAP были больше или равны показателям факторов t Oct-2 или BOB.1, которые имели более слабый показатель (1+/2+) и чаще наблюдались в RS клетках. Во всех случаях, за исключением одного, при отсутствие фактора ВSAP (5 случаев [9%]), также наблюдалось отсутствие факторов Oct-2, BOB.1, и PU.1.

Экспрессия маркеров B- клеток, наблюдалась в меньшем количестве случаев, 30% (17/57), 19% (10/54), и 6% (3/53) экспрессии маркеров CD20, CD22, и CD79a, соответственно. Положительная экспрессия CD20 маркеров, наблюдалась в большинстве клеток RS. В большинстве случаев экспрессия маркеров CD22 и CD79a была низкой. В 8 случаях (15%), наблюдался маркер CD20 с коэкспрессией маркеров CD22 или CD79a, и в 1 случае отмечалась экспрессия только CD22 или CD79a маркеров. Случаев экспрессии всех 3 маркеров не было. Из 11 случаев экспрессии факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1, 7 случаев показали экспрессию только одного B- клеточного маркера, 4 других случая показали экспрессию двух B- клеточных маркеров.

Узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием.



Опухолевые клетки во всех 5 случаях NLPHL, показывали присутствие факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1, с большим преобладанием фактора Oct-2 Рисунок 3. Не отмечалось присутствие фактора PU.1. Во всех 5 случаях отмечалась более выраженная экспрессия только CD20 маркера, по отношению к маркерам CD22 и CD79a.

Рисунок 3.

Узловая лимфома с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL).

A

. H&E клетки с малыми лимфоцитами (H&E, Ч1, 000).

B

. Во всех клетках определяется (специфичный B-клеточный активатор белка [BSAP], Ч1,000).

C

. случаев обнаружения PU.1 не было. При этом малые B- клетки положительны (PU.1, Ч1,000).

D

. Обнаружение во всех случаях октаймер - обязательный фактор транскрипции 2 (Oct-2) (Oct-2, Ч1,000).

E

. Подобно факторам BSAP и Oct-2, наблюдается наличие во всех случаях обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) (BOB.1, Ч1,000).

F

. Все случаи положительны для всех 3 B- клеточных маркеров (l CD20, Ч1,000; middle panel, CD22, Ч1,000; CD79a, Ч1,000).

DLBCL, включая TCRLBCL.



Все 25 случаев показывали наличие факторов BSAP и Oct-2.


Рисунок

4.

(DLBCL).

A

.

Типичное проявление DLBCL, с преобладанием больших опухолевых клеток (H&E, Ч400).

B

. Во всех больших опухолевых клетках обнаружен (специфичный B-клеточный активатор белка, Ч200).

C

.

Почти половина случаев была отрицательна для PU.1.В то время, как клетки гистиоциты были положительны для этого фактора (PU.1, Ч200).

D

. Обращает на себя внимание присутствие во всех больших опухолевых клетках октаймер - обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2) (Oct-2, Ч200).

E

. Присутствие фактора обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) распространенно повсеместно (BOB.1, Ч200).

F

. Все случаи показывают присутствие маркеров CD20 (Ч400) и CD79a (Ч400). В большинстве случаев определялся маркер CD22 (Ч400); по сравнению с маркерами CD20 и CD79a.

За исключением 1 случая TCRLBCL, все остальные случаи были положительны для BOB.1. Из этих 25 случаев, 10 (40%), отмечалась слабо положительная или отрицательная индукция фактора PU.1, все 4 случая TCRLBCL были отрицательны. Во всех этих изучениях наблюдалось присутствие маркеров CD20 и CD79a (25/25 и 21/21, соответственно). 22 случая 20 (91%) были положительны для маркера CD22.

T/нулевые клетки ALCL.



Ни в одном из 8 случаев не обнаруживались факторы

BSAP, Oct-2, PU-1 или B- клеточные маркеры. В 2 случаях имелся слабый диапазон для фактора BOB. 1.

Обсуждение.



Список 1 показывает наши результаты, а список 2 показывает публикации других исследований.

Список 2. Опубликованные данные экспрессии факторов транскрипции в образцах тканей.






Антитела и использованные клоны





CHL







NLPHL





Ссылка и год



BSAP



Oct-2



BOB.1



PU.1



BSAP



Oct-2



BOB.1



PU.1

BSAP



Oct-2



BOB.1



PU.1



Krenacs et al,23 1998

7077







5/14







2/4







Foss et al,16 1999

NS







28/31







10/10







Re et al,11 2001



PT1

sc-955





0/20

0/18











Stein et al,10 2001



$







4/32

8/32





35/35

35/35



Torlakovic et al,17 2001

24

AB-1



G148-74

27/29

0/29



2/35

15/15

15/15



15/15

Hertel et al,22 2002

24





G148-74

13/18





0/18









Saez et al,12 2002



sc-233

sc-955





17/24

17/24





5/5

5/5



Torlakovic et al,18 2002

24







112/117







58/58







Marafioti et al,46 2003



sc-233

sc-955



















Total









185/209

21/105

25/74

2/53

85/87

55/55

40/40

15/15











(88.59)

(20.0)

(34)

(34)

(98)

(100)

(100)

(100)

Present study

24

sc-233

sc-955

G148-74

52/57

19/57

16/57

1/57

5/5

5/5

5/5

0/5
2010-07-19 18:44 Читать похожую статью
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • © Помощь студентам
    Образовательные документы для студентов.